Két módszer a peptidek szilárd -fázisú gyantákról való lehasítására
Eljárás polipeptidek lehasítására szilárd{0}}fázisú gyantákról
szilárd fázisú Fmoc A peptidek kémiai szintetizálása után számos módszer létezik a hasításra. Most két, mindenki által általánosan használt alaptípust mutatunk be.
1. Erős savas módszer (általánosan használt TFA)
Helyezze a száraz gyantát egy rázólombikba, és adjon hozzá megfelelő mennyiségű scavengert (Scavengers) Hasító reagens trifluor-ecetsav (TFA), 10-25 ml/g gyanta, fedje le, és időnként rázza szobahőmérsékleten. Szűrje le a gyantát új TFA-val. Mossa meg a gyantát 2-3 alkalommal, keverje össze a szűrletet, és cseppenként adjon hozzá 8-10-szeres mennyiségű jégétert. Néha egy része lepárolható a TFA-ról Nyers peptid csapadékot kaptunk. A dietil-étert jéggel le lehet hűteni a kicsapás hatékonyságának javítása érdekében. Végül gyűjtsük össze a kicsapódott nyers peptidet.
Alkalmazható gyanta:királygyanta vagy Rink Amide Resin
2. Gyenge savas módszer (hígított TFA vagy ecetsav)
1% TFA:
1 g A polipeptid-függő gyantát 1% TFA-t tartalmazó oldathoz adtuk. A diklór-metán oldatos üveg rázólombikot lezártuk és 2 percig ráztuk. Nitrogénnel öntse a szűrletet egy másik új, 10% piridint tartalmazó metanolos rázólombikba. Ismételje meg a fenti műveletet 10-szer. Használjon 30 ml DCM-et, 30 ml MeOH-t. Mossa le a maradék védett peptideket a gyantán egymás után háromszor. TLC-vel vagy HPLC-vel Ellenőrizze a tisztítási maradékot. Az összes szűrletet egyesítjük, és az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk, hogy 5 térfogat% maradjon. adjunk hozzá 40 ml vizet, és jég{16}}hűtjük a keveréket, hogy elősegítsük a kicsapódást. Szűrés után mossa le a terméket tiszta vízzel háromszor, és helyezze vákuumszárító dobozba felhasználásra. KOH vagy P2O5 Hagyja megszáradni.
híg ecetsav:
használjon AcOH/TFE/DCM-et (2:2:6) Kezelje a gyantán lógó peptideket vágóoldattal 2 órán keresztül, szűrje le a gyantát, és háromszor mossa át a gyantát vágóoldattal. Adjunk hozzá 15-szörös térfogatú n-hexánt a kevert szűrlethez, és forgó bepárlással eltávolítsuk a felesleges ecetsavat. A peptid-visszanyerési módszereket az alábbiakban részletezzük.
Alkalmazható gyanta:2- CTC gyanta