Reagensek peptidkondenzációhoz

Jelenleg a peptidek szintézisében a karboxil aktivációs módszereket elsősorban a peptidreakciók befejezésére alkalmazzák. A legkorábbi módszerek az aminosavak savkloridokká, azidokká, szimmetrikus anhidridekké és vegyes savanhidridekké történő aktiválása voltak. Az ilyen körülmények között zajló aminosav racemizáció megléte, a reakcióreagensek veszélye és az előállítás bonyolultsága miatt azonban ezeket fokozatosan felváltották a későbbi kondenzációs reagensek, amelyek szerkezetük szerint két típusra oszthatók.: A főbb kondenzációs reagensek: Karbodiimid típusú, óniumsó típusú (Urónium).

Főleg: DCC, DIC, EDC.HCl várjon. DCC használata végezze el a reakciót, a DCU miatt létezik DMF Nagyon kevéssé oldódik és fehér csapadék képződik, ezért szilárd fázisú szintézisben általában nem használják. Mivel azonban olcsó, folyékony fázisú szintézisben szűréssel eltávolítható, és még mindig széles körben használják. EDC.HCl Vízben való oldhatósága miatt gyakran használják polipeptidek és fehérjék összekapcsolására, és igen sikeres is. Az ilyen típusú kondenzációs reagensek egyik legnagyobb hátránya azonban, hogy ha önmagában használjuk, több mellékreakció lép fel. A kutatások azonban azt mutatják, hogy ha a HOBt aktiválási folyamat során hozzáadják, HOAt Az ilyen reagensek nagyon alacsony tartományban képesek szabályozni a mellékreakciókat. A reakció mechanizmusa a következő:

2. ábra DIC aktiválási reakció mechanizmusa

Az óniumsó típusú kondenzációs reagensek nagy reakcióképességgel és gyors sebességgel rendelkeznek, és ma már széles körben használatosak, főként: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP várakozás. Ennek a reagensnek a használata során szerves bázist kell hozzáadni, például diizopropil-etil-amint (DIEA), N- metilmorfolint (NMM). Az aminosav csak a reagens hozzáadása után aktiválható. A reakció mechanizmusa a következő:

A szilárd{0}}fázisú peptidszintézishez használt gyanták általában polisztirol-divinilbenzol anyagok, méretük 75 és 150 μm között van. A keresztkötés mértéke 1-2% között van, és a legtöbb jelenleg használt gyanta 1% keresztkötésű, mert ezen a fokon jó a DMF,- duzzadó tulajdonságokkal rendelkezik, és háromdimenziós hálózati szerkezete van, és a reaktáns molekulák szabadon mozoghatnak a gyantában. A gyanta legkritikusabb része az összekötő kar, amely az egyik végén a gyantához kapcsolódik, a másik végén pedig reakcióhelyként szolgál. A jelenleg széles körben használt gyanták a következők: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA várakozás. a PAM-ban az MBHA-t a BOC stratégiában alkalmazzák, mert nagyon stabil saválló, HF-nek, TFMSA-nak kell lennie Csak erős savas körülmények között vágható.

A szilárd -fázisú peptidszintézis befejezése után megfelelő hasító reagenst kell kiválasztani a peptidnek a gyantáról történő lehasítására, majd jég-éterrel történő kicsapásra, a csapadékot centrifugálással összegyűjtjük, majd HPLC-vel elválasztjuk, megtisztítjuk és fagyasztva{1}}szárítjuk a végső peptidterméket.

A kiválasztott különböző gyanták és aminosavszekvenciák miatt a hasítás során kiválasztott hasítási módszerek nem teljesen azonosak. Általában a hasítási körülményeket savas körülmények között választjuk meg. A PAM-hoz MBHA gyantát, általában használt HF-vágást, p-krezolt, p-merkaptofenolt, anizolt és egyéb reagenseket kell hozzáadni a vágási folyamat során. Wang, Rink{5}}Amid, Trt-gyanta, általában TFA-vágás esetén pedig adjon hozzá etilénglikolt, anizol-szulfidot, vizet, triizopropil-szilánt, fenolt stb. a vágási folyamat során.

Ezeket az adalékos reagenseket főként karbokation-befogó reagensként használják. A cél a hasítási reakció során keletkező karbokation megkötése és az ezen karbokation ionok egyes aminosav-oldalláncokon történő támadása által okozott mellékreakciók csökkentése. Azok az aminosavak, amelyek nagyobb valószínűséggel okoznak mellékreakciókat, a következők: Trp, Tyr. A vágóreagens adagolása általában 10-15 ml/g gyanta.

Általánosan használt vágási arányok: HF/p-krezol/p-tiokrezol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), A reakciót általában szobahőmérsékleten 2 óra-4 óra között végezzük.

A szilárd{0}}fázisú peptidszintézis során gyakran találkozunk a peptidszintézis kudarcával vagy az alacsony szintézis hatékonyságával. A fő ok a peptid szekvenciára vezethető vissza, mert egyes peptidszekvenciák képződnek a gyantán. -A hajtogatás megváltoztatja a gyanta duzzadási tulajdonságait, és a reakció aktív helyeit is eltemetheti a gyantában, megnehezítve a reakció lefutását. A jelenlegi jelentések ezt mutatják

Használjon oldószerkeveréket, DMSO/DMF, 6 N guanidin/DMF oldatot

Növelje a reakcióhőmérsékletet, vagy használja a mikrohullámú módszert

Használjon kaotróp sókat, LiCl, NaClO4 várjon.

Használjon jobb duzzadási tulajdonságokkal rendelkező PEG{0}}PS gyantát, miközben csökkenti a gyantaterhelést (0,05-0,2 mmol/g)

​